Wako 质谱级赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase

Wako 质谱级赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase

质谱级赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase

 

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本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶,该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽,可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶,可更好地切断赖氨酸基团的多肽,增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装,是方便使用的冷冻干燥品。20 μg/支可用于100-200个样品的凝胶内消化。

来源:细菌

外观:冻干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 缓冲液,pH8)

活性:0.03~0.07 AU/vial

分子量:27,000(琼脂糖过滤),30,000(SDS-PAGE)

溶解性:溶于水或缓冲液

稳定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 缓冲液中,可在4℃稳定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃时能稳定保存,但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值:9.0~9.5

等电点:6.9~7.0

底物特异性:

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制剂:DFP、PMSF、TLCK

◆特点

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装,方便使用

应用

分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lys-C)和 Tp与Lys-C 联用进行胶内酶切的效果比较。

牛血清蛋白 BSA 的条带(100 ng)通过 SDS-PAGE 获得,然后分别用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 进行酶切,再用 MALDI-TOFMS 法进行分析。

这些蛋白酶的实验效果见下表。

表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的结果对照

这些结果表明 Lys-C 酶解的错误裂解率最低。Tp 酶解时加入 Lys-C 后,错误裂解率有所降低,同时,可以鉴定出更多的多肽。

Tp Lys-C Lys-C+Tp
裂解位点 精氨酸和赖氨酸的C端 赖氨酸的C端 精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率

(错误裂解所占比例  )

多(8%) 很少(0%) 少(3%)
鉴定出的多肽数量 17 19 22

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胰蛋白酶(Tp)(图 a)和赖氨酰肽链内切酶(Lys-C)+Tp( 图 b)酶切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp 酶切后,可以在 m/z=2000 时得到吸收峰,而单独的 Tp 酶切在 m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明 Lys-C 可以提高测序覆盖度。

 

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada 博士提供 )

赖氨酰肽链内切酶

赖氨酰肽链内切酶,最初由 Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键,用于蛋白测序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小时之后,仍然拥有完整的生物活性。

外观   冻干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8) 活性   见包装
分子量   27,000(凝胶过滤);30,000 (SDS-PAGE) 溶解性   易溶于水或缓冲液
最佳pH   9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性 pH) 等电点   6.9-7.0
抑制剂   DFP、PMSF、TLCK 来源   细菌
稳定性  溶于pH 值 5.0-12.0 的缓冲液中,可于4℃稳定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的缓冲液中,可于30℃稳

定保存,但是50℃及以上不稳定。

单位定义  一单位酰胺酶(AU)指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量。
底物特异性  水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
 非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
125-05061 Lysyl Endopeptidase®, MS Grade
赖氨酰肽链内切酶,MS级
20 μg×5 质谱级