重组赖氨酰内肽酶RLys-C

 

 

 

 

 

 

 

 

◆概述

赖氨酰内肽酶最早从土壤细菌无色杆菌Achromobacter lyticus中分离得到，能够特异性识别与切割肽链中Lys羧基端肽键，常被用于蛋白测序及Lys-X化合物的酶催化合成。

艾美迪选用Achromobacter lyticus来源的，克服大肠杆菌重组表达技术难题进行制备。本品最适pH 9.0~9.5,等电点为pH 6.9~7.0；最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。在适宜温度下，该酶稳定性良好，在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后，生物活性未发生降低。可广泛用于蛋白组学分析，蛋白、抗体类药物质量检测，多肽、蛋白类产品制备工艺中。

◆特性

●　高比活性，高特异性，可消化难以酶切的位点，空间构象复杂或疏水性较强的蛋白（如膜蛋白）同样适用

●　活性稳定，对尿素、乙腈等变性剂耐受能力强

●　批量化生产，连续批次质量稳定，批间差小

●　高纯度，重组表达避免了可能存在的杂酶残留（e.g. Arg-C，Lys-N等）

◆来源

重组 E. coli 菌株，其克隆有来自的无色杆菌（A. lyticus）的蛋白酶I基因。

◆酶活定义

在0.2 mol/L pH 9.0的Tris-HCl缓冲中，温度为37±2℃的条件下， 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量为一个活性单位（AU）。

◆纯度

将 rLys-C以DTT 还原处理后， 还原电泳显示纯度＞99% 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆使用方法

本品为冻干粉，使用前先使用超纯水或25 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5溶解。

◆应用实例

RLys-C酶切重组人门冬胰岛素原（Pro-Insulin-Aspart）

底物Pro-Insulin-Aspart分子量约为7 kDa，含有3个赖氨酸（K），采用 Lys-C 酶切的理论肽段示意图如下：

酶切条件：酶与底物的质量比为 1:10000，在50 mM Tris-HCl，pH 8.5中37℃酶切16 小时。

峰 A：酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart

峰 B：酶切后 B链+C肽+A链（去引导肽）

峰 C：酶切后B链+A链（去引导肽和C肽）

名称	RT	Area	Area%	质谱量	酶切位点	对应肽段
Pro-Insulin-Aspart 未酶切对照	10.45	155.045	100%	7096.94	/	酶切前
以IMD-RLys-C-酶切产物 （酶：底物1:10000）	11.57	201.6	100%	5724.54	① ② ③	B链+A链
以其他公司重组Lys-C酶产物 （酶：底物1:10000）	10.49	146.9	61.78%	7096.94	/	酶切前
	10.62	81.5	34.29%	6006.84	①	B链+C肽+A链

艾美迪的 RLys-C 酶切产物为切除引导肽和 C 肽的门冬胰岛素前体，酶切位点①②③均酶切完全。

而其他公司产品仅部分切开酶切位点①，切除效率仅为34.29%，酶切位点②③均未被酶切，未能得到序列正确的门冬胰岛素前体。

◆与其他公司产品对比相同底物浓度的酶切条件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率显著高于其他品牌同类产品。以生成的肽段 YDDDDK 计算，艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同类产品高约9倍；以生成的肽段 RGWK 计算，艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同类产品高约8.6倍。

底物	酶切位点对比	艾美迪	其他公司重组Lys-C
重组人门冬胰岛素原 （Pro-Insulin Aspart） 分子量约为7 kDa，含有3个K	①PK↓	++	+
	②DK↓	++	–
	③GK↓	++	–
重组人普通胰岛素原 （Pro-Insulin） 分子量约为7 kDa，含有3个K	①PK↓	++	+
	②PK↓	++	+
	②AK↓	++	+
PJ-10S小肽 分子量约为1 kDa，含有3个K	①DK↓	++	+

◆产品信息

产品编号	产品名称	规格
RLYS-C0401	RLys-C 重组赖氨酰内肽酶	20 μg
RLYS-C0403	RLys-C 重组赖氨酰内肽酶	1 mg

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