亲和蛋白磁珠Tamavidin® 2-REV Magnetic Beads
<Tamavidin® 2-REV ~和生物素可逆性结合>
Tamavidin® 2-REV是新亲和蛋白[Tamavidin® 2]的变体。由于生物素的结合力降低，可形成可逆的生物素结合复合物。因此，通过添加过量生物素，可以竞争性洗脱生物素分子。
（之前的亲和蛋白/链亲和素与生物素的结合力非常牢固且不可逆。）
◆MagCapture™ Tamavidin® 2-REV 概要
MagCapture™ Tamavidin® 2-REV试剂组成：磁珠悬浮液，TBS缓冲液（pH7.4），0.05w/v%叠氮化钠，50w/v%甘油。
◆MagCapture™ Tamavidin® 2-REV使用案例
生物素化DYKDDDDK-BAP回收性能验证。
竞争洗脱的生物素溶液组成：2 mmol/L 生物素，PBS溶液。
竞争洗脱的生物素溶液组成：2 mmol/L 生物素，PBS溶液。
| 添加生物素化DYKDDDDK-BAP 10 ng至细胞裂解液（相当于1×106细胞数）与原产品Streptavidin磁珠比较添加回收性能。
MagCapture™ Tamavidin® 2-REV与原产品比较，低背景，能够回收到目生物素化DYKDDDDK-BAP。 |
生物素抗体免疫沉降
采用生物素化Anti-hAgo2 Mab，从K562细胞回收内源性人Ago2蛋白质。
与原产品Streptavidin磁珠相比，MagCapture™ Tamavidin® 2-REV是因其低背景，能够回收到内源性人Ago2蛋白质。
◆RNA Pull-down检测
应用（HOTAIR RNA）
通过RNA Pull-down检测比较原产品链霉亲和素磁珠和MagCapture™ Tamavidin® 2-REV的性能。
RNA Pull-dow检测后的生物素可竞争性洗脱。（数据未公布）。
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A |
用生物素标记HOTAIR RNA的有义链和反义链进行RNAPull-down检测，通过SDS样品缓冲液洗脱，纯化的蛋白质样本通过银染色可检测出来。各RNA探针的反应样本均采用的是K562（5×106细胞数）的总细胞裂解物。 |
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B |
利用RNAPull-down实验获得的样本进行免疫印迹实验。一抗是抗Ezh2抗体（D2C9）以及LSD1抗体（C69G12）。 MagCapture™ Tamavidin® 2-REV与原产品相比，可高效率且低背景回收RNA结合蛋白。 |
Tamavidin® 2 系列 产品概要
Magnetic Beads
本产品是将新规格抗生物素蛋白样蛋白的Tamavidin® 2-REV固相化在磁珠上。
Tamavidin® 2-REV是新规格的抗生物素蛋白样蛋白。因通过氨基酸修饰具有可逆的生物素结合性能，在结合生物素分子后，通过添加过量的生物素在温和洗脱条件下可回收靶分子。
Tamavidin® 2重组体
| 产品名称 | 等电点（pl）※1 | 耐热性※2 | 有机溶剂耐性 | 生物素结合速度系数(ka(M-1S-1)) | 生物素解离速度系数(kd(S-1)) | 分子量（四聚物） |
| Tamavidin® 2 | 7.4 | Tm=85℃ | + | (1.0±0.5)×106 | 检测极限值以下※4 | 约60kDa |
| Tamavidin® 2-REV | 8 | Tm=75℃ | – | (1.3±0.5)×106 | (1.5±0.4)×10-5 | 约60kDa |
| Tamavidin®
2-HOT |
7.23 | 高耐熱性 | 高耐性※3 | (3.0±1.7)×105 | 检测极限值以下 | 约60kDa |
| ※1 | 等电点：产品均是通过氨基酸序列计算出来的数值。 |
| ※2 | 耐热性（TM值）：生物素结合活性加热20分钟可达到加热前的50%。关于Tamavidin® 2-HOT，因为在99.9℃加热30分钟结合
活性保持在90%以上，所以算不出数值。 |
| ※3 | 高耐性：40-50%DMSO中 |
| ※4 | 检测极限值：5×10-6(kd(S-1)) |
欲了解相关资料请点击：Tamavidin® 2-REV Magnetic Beads技术研讨会
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 205-18263 | Tamavidin® 2, recombinant Tamavidin® 2, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 |
| 203-19401 | Tamavidin® 2-REV, recombinant Tamavidin® 2-可逆性, 重组型 |
1 mg | 免疫化学用 |
| 209-19403 | Tamavidin® 2-REV, recombinant Tamavidin® 2-可逆性, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 |
| 205-19363 | Tamavidin® 2-HOT, recombinant Tamavidin® 2-耐热性, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 |
| 136-18341 | MagCaptureTM Tamavidin® 2-REV MagCaptureTM Tamavidin® 2-REV RNA回收试剂 |
20 mL | 基因研究用 |
【参考文献】
＜Tamavidin® 2＞
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[1] |
Takakura, Y. et al., “Tamavidins – novel avidin-like biotin-binding proteins from the Tamogitake mushroom.”, FEBS Journal, 276, 1383(2009).
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[2] |
Takakura, Y. et al., “Tamavidin, a versatile affinity tag for protein purification and immobilization.”,J. Biotechnol., 145, 317(2010).
|
＜Tamavidin® 2-REV＞
|
[3] |
Takakura, Y. et al., “Tamavidin2-REV: An engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.”, J. Biotechnol., 164(1), 19(2013).
|
＜Tamavidin® 2-LPI＞
|
[4] |
Takakura, Y.et al., “Engineering of novel tamavidin 2 muteins with lowered isoelectric points and lowered non-specific binding properties.”, J. Biosci. Bioeng.,114(5), 485(2012). |
＜Tamavidin® 2-HOT＞
|
[5] |
Takakura, Y. et al., “Tamavidin-HOT, a highly thermostable biotin-binding protein.”, J. Biotechnol., 169, 1(2014).
|
|
[6] |
Ukekawa, R. et al., “A useful new tool for isolation of long non-coding RNA-binding proteins.”,Medical Science Digest, 40(7), 355(2014).
|
|
[7]
|
Takakura, Y. et al.: “Tamavidin2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.”, J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013). |