wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

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wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。

特点：

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）
产品描述

1、粉末；

2、在4度可保存至少一年；

3、检测磷酸化蛋白；

4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。

可用于免疫印迹实验，二维电泳。

产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。

Wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的相关问题解答

Q. BTL-104，BTL-105，BTL-111 之间有什么区别？
A. BTL-104，BTL-105 和BTL-111 三者连接链(Linker) 的长度不同，但使用相同。BTL-111 灵敏度最高。

Q. 检测灵敏度到什么水平？
A. 可以达到ng 级别。需要使用高发光试剂，比如ImmunoStar LD。

Q. 使用该产品时还需要别的试剂吗？
A. 需要制备Streptavidin-conjugated HRP 溶液。

Q. Phos-tag ™ Biotin 可以使用多少次？
A. 主要决定于使用次数以及使用量，以下实验次数仅作参考
BTL-104：130-1300 次；
BTL-105：113-1130 次；
BTL-111 1 mM 水溶液：10-100 次

Q. 可测定磷酸化蛋白吗？
A. 根据条带的浓度可以进行半定量分析。

Q. 能否确定结合磷酸基团的数目？
A. 不能。

Q. 能否剥除Phos-tag ™ Biotin 中的抗体？
A. 可以。与含有62.5 mM Tris-HCl（pH6.8）、2%(w/v) SDS
和1 M 2-mercaptoethanol 溶液混合后，振荡15 分钟。将混合液用1×TBS-T 漂洗3 次，每次10 分钟。

Q. 推荐使用哪种膜？
A. 推荐使用PVDF 膜。

Q. 使用Phos-tag ™ Biotin 要求终止反应吗？
A. 不需要，因为终止反应会降低灵敏度。

Reference  参考文献

    1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).
    1. “Phosphate-binding tag: A new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 5, 749-757 (2006).
    1. “Detection and Quantification of On-Chip Phosphorylated Peptides by SurfacePlasmon Resonance Imaging Techniques Using a Phosphate Capture Molecule”, K. Inamori, M. Kyo, Y. Nishiya, Y. Inoue, T. Sonoda, E. Kinoshita, T. Koike, and Y. Katayama, Anal. Chem., 77, 3979-3985 (2006).
  1. “Identification on Membrane and Characterization of Phosphoproteins Using an Alkoxide-Bridged Dinuclear Metal Complex as a Phosphate-Binding Tag Molecule”, T. Nakanishi, E. Ando, M. Furuta, E. Kinoshita, E. Kikuta-Kinoshita, T. Koike, S. Tsunasawa, and O. Nishimura, J. Biomol. Tech., 18, 278-286 (2007).