CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒CTGF ELISA 试剂盒

结缔组织生长因子CTGF(Connective Tissue Growth Factor)是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38 kDa的分泌蛋白。除了参与细胞粘附和软骨细胞的增殖和分化以外,它也被认为是组织纤维化的一个主要因素,还可作为纤维化疾病的候选标志物。

FUJIFILM Wako可提供用于检测CTGF全长的ELISA试剂盒以及检测全长+N末端的ELISA试剂盒,通过组合使用这两种ELISA试剂盒,能够准确检测作为特发性肺纤维化(IPF)候选生物标志物的血液N末端CTGF片段。

◆什么是CTGF?


CTGF( Connective Tissue Growth Factor)是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38kDa的分泌蛋白。它是CCN (Cyr61/CTGF /Nov)家族的一种,亦称为CCN2。CTGF主要由Module 1 – Module 4的四个部分组成,Module 1称为IGF结合结构域,Module 2称为VWC结构域,Module 3称为TSP-1结构域,Module 4称为CT结构域。各结构域通过与不同的因子结合来发挥作用。

CTGF ELISA 试剂盒

CTGF在组织纤维化中发挥重要作用,因此可作为纤维化的候选生物标志物。CTGF由TGF-β诱导表达,通过促进产生细胞外基质的肌成纤维细胞的分化和胶原蛋白的合成,从而参与纤维化1)。在小鼠皮肤纤维化中,TGF-β和CTGF已被证明分别在纤维化的发生和持续中起重要作用2)。此外,还有报告称CTGF与软骨细胞的增殖和分化,细胞间的粘连有关。

CTGF除了全长CTGF之外,还有Module 2 - Module 3间被切断产生的N末端(Module 1-2)CTGF和C末端(Module 3-4)CTGF。由于CTGF(C末端)容易被分解,所以血液中主要以CTGF (全长)和CTGF (N末端)的形式存在。CTGF (N末端)作为特发性肺纤维化(IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)的生物标志物备受期待3),但由于CTGF(全长)和CTGF(N末端)同时存在,所以单独检测CTGF(N末端)非常困难。


◆试剂盒组成

96次用

  抗体固相化孔板

1 plate  

  CTGF标准品

1支  

  缓冲液

20 mL  

  生物素结合抗体溶液

100 μL  

  过氧化物酶结合链霉亲和素溶液

100 μL  

  TMB溶液

12 mL  

  反应终止液

12 mL  

  清洗液(10×)

100 mL  

  标准品样品制备溶液

100 mL  

 孔板封条

4片  

◆CTGF ELISA试剂盒 Wako


FUJIFILM Wako可分别提供检测CTGF全长以及全长+N末端的ELISA试剂盒。通过组合使用两种ELISA试剂盒,可准确检测特发性肺纤维化(IPF)的生物标志物——血液中的N末端CTGF4)

CTGF ELISA 试剂盒

产品系列

产品名称

CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako

CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako

产品编号

290-84701

292-84901

检测对象

CTGF(全长

CTGF(全长+N末端

检测原理

CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒

样品

人血清,人血浆(EDTA)

标准曲线范围

7.81-500 pM

所需样品量

人血清:5 μL,人血浆(EDTA):10 μL

检测时间

2 h 50 min

检测法

显色法

◆性能数据

■ 全长,N末端片段,C末端片段的交叉性


分别使用各ELISA试剂盒与全长,N末端片段,C末端片段反应,确认其交叉性。

CTGF ELISA 试剂盒

【结果】


CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长,CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长和N末端片段。

■ 与CCN家族的交叉性


确认了包含CTGF在内的与CCN家族的交叉率(500 pM,n=8)。

CTGF ELISA(全长)

交叉率 (%)

CTGF ELISA(全长+N末端区域)

交叉率 (%)

CCN1

<0.5

N.D.

CCN2(CTGF)

100

100

CCN3

<0.5

N.D.

CCN4

<0.5

N.D.

CCN5

<0.5

N.D.

CCN6

<0.5

N.D.

N.D. = 未检出


【结果】

FUJIFIM Wako的试剂盒在CCN家族中,对CCN2(CTGF)显示高特异性。

■ 加标回收测试


CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako


样品ID

添加量 (pM)

检测值 (pM)

回收量 (pM)

回收率 (%)

人血清
样品No.15

0

61.5

10

71.4

9.9

99

50

110

48.5

97

100

163

102

102

150

215

154

103

300

370

309

103

平均

101

人血浆(EDTA)
样品No.15

0

71.5

10

80.8

9.3

93

50

121

49.5

99

100

174

103

103

150

227

156

104

300

380

309

103

平均

100

CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako


样品

添加量 (pM)

检测值 (pM)

回收量 (pM)

回收率 (%)

人血清
样品No.16

0

37.8

10

47

9.2

92

50

87.4

49.6

99.2

100

141

103

103

150

191

153

102

300

343

305

102

平均

99.6

人血浆 (EDTA)
样品No.16

0

16.9

10

26.2

9.3

93

50

65.6

48.7

97.4

100

122

105

105

150

173

156

104

300

326

309

103

平均

100

■ 稀释线性测试


CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako


  人血清

  人血浆

CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒


CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako


  人血清

  人血浆

CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒


◆应用数据


■ N末端CTGF的检测(稀释线性测试)


使用梯度稀释的人血清或人血浆(EDTA),用CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长+N末端, 用CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长。求差值计算CTGF(N末端)量,确认稀释线性。

CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒

样品

稀释倍率

CTGF(全长+N末端)(pM)

CTGF(全长)(pM)

CTGF(N末端)(pM)

血清

1/1

1735

952

783

1/2

875

495

380

1/4

417

237

180

血浆(EDTA)

1/1

684

126

558

1/2

347

66.2

281

1/4

157

34.9 * 参考值

122

【结果】


使用该方法检测定量CTGF(N末端),可观察到高稀释线性。



■ 健康者和IPF患者血浆中N末端CTGF的检测

使用CTGF(全长+N末端)ELISA试剂盒 Wako和CTGF(全长)ELISA试剂盒 Wako,检测从健康者以及特发

性肺纤维化(IPF)患者中提取的血浆(EDTA),并求出N末端CTGF的量。

CTGF ELISA 试剂盒

健康者

ID

CTGF(全长+N末端)(pM)

CTGF(全长)(pM)

CTGF(N末端)(pM)

1

494

83.4

411

2

535

116

419

3

580

155

425

4

661

129

532

5

383

63.5

319

mean

421

SD

75.6


IPF患者

ID

CTGF(全长+N末端)(pM)

CTGF(全长)(pM)

CTGF(N末端)(pM)

1

1226

213

1013

2

1004

187

817

3

432

35.4

397

4

1422

278

1144

5

938

39.9

898

6

682

73.2

609

7

1123

168

955

8

849

45.5

804

9

857

60.6

796

mean

826

SD

221


【结果】


IPF患者血浆中N末端的CTGF量明显高于健康者。

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※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

FAQ


◆关于样品


Q1:血液样品建议使用何种抗凝剂?

A1:参考以下文献,肝素血浆中CTGF(N末端)的值高于EDTA血浆和柠檬酸盐血浆。因此,不建议使用肝素作为抗凝剂。

A1:<参考文献> Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).

A1: Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor


◆关于试剂盒

Q1:试剂盒中的抗体是否有销售?

A1:FUJIFILM Wako供应以下固相化抗体。

A1:抗CTGFModule 1,单克隆抗体(30D2)(产品编号:018-27423


检测抗体不单独销售。FUJIFILM Wako可供应Module 2识别抗体(产品编号:015-27433)及Module 4识别抗体(产品编号:019-27453),但与本试剂盒使用抗体的克隆不同。

Q2:标准品是如何标价的?

A2:标准品参考以下文献进行标价。

A1:Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).



◆关于试剂盒的使用


Q1:本试剂盒进行检测时所需的试剂、器具和设备?

A1:使用本试剂盒需要以下试剂、器具和设备。

A1:● 纯净水(蒸馏水)

A1:● 标准溶液/样品稀释用试管

A1:● 清洗液稀释用玻璃器具(量筒/烧杯)

A1:● 可更换吸头的移液器(可准确移液10 μL以及 200~500 μL的一次性吸头)

A1:● 可连续分注100 μL的移液器

A1:● 具有吸水性的毛巾(清洗后去除孔板残留液体)

A1:● 涡旋振荡器

A1:● 微孔板振荡器(约500~800 rpm)

A1:● 96孔板用清洗器(建议使用)或清洗瓶

A1:● 读板器 (450±10 nm / 600~650 nm)

A1:● 数据处理软件

Q2:两个试剂盒必须配合使用吗?

A2:若检测CTGF (N末端, Module 1-2),需两个试剂盒配合使用。

A1:若只检测CTGF(全长),只需购买CTGF(全长) ELISA试剂盒。

Q3:96次用可检测几个样品?

A3:标准品使用16孔(n=2),n=1时可检测80个样品,n=2时可检测40个样品。

 

Q4:试剂盒可分多次使用吗?

A4:可以,孔板设计为可每8个孔进行分割的样式,试剂盒包含充足数量的标准品。

A4:但是多次使用时,每次实验前都需重新绘制标准曲线,并且可检测的样品数量也会减少。另外,孔板封条只有4片,请根据需求进行使用。

参考文献


1. 

Biernacka, A., Dobaczewski, M., and Frangogiannis, N. G.: Growth Factors29(5), 196(2011).
TGF-β signaling in fibrosis

2. 

Mori T., et al.: J. Cell Physiol., 181(1), 153(1999).
Role and interaction of connective tissue growth factor with transforming growth factor-beta in persistent fibrosis: A mouse fibrosis model.


3.

Kono, M. et al.: Clin. Chim. Acta412, 2211(2011).

Plasma CCN2 (connective tissue growth factor; CTGF) is a potential biomarker in idiopathic pulmonary fibrosis (IPF)

4.

Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).
Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor