CTGF ELISA 试剂盒
结缔组织生长因子CTGF（Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38 kDa的分泌蛋白。除了参与细胞粘附和软骨细胞的增殖和分化以外，它也被认为是组织纤维化的一个主要因素，还可作为纤维化疾病的候选标志物。
FUJIFILM Wako可提供用于检测CTGF全长的ELISA试剂盒以及检测全长+N末端的ELISA试剂盒，通过组合使用这两种ELISA试剂盒，能够准确检测作为特发性肺纤维化（IPF）候选生物标志物的血液N末端CTGF片段。
◆什么是CTGF？
CTGF（ Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38kDa的分泌蛋白。它是CCN (Cyr61/CTGF /Nov)家族的一种，亦称为CCN2。CTGF主要由Module 1 – Module 4的四个部分组成，Module 1称为IGF结合结构域，Module 2称为VWC结构域，Module 3称为TSP-1结构域，Module 4称为CT结构域。各结构域通过与不同的因子结合来发挥作用。
CTGF在组织纤维化中发挥重要作用，因此可作为纤维化的候选生物标志物。CTGF由TGF-β诱导表达，通过促进产生细胞外基质的肌成纤维细胞的分化和胶原蛋白的合成，从而参与纤维化1）。在小鼠皮肤纤维化中，TGF-β和CTGF已被证明分别在纤维化的发生和持续中起重要作用2）。此外，还有报告称CTGF与软骨细胞的增殖和分化，细胞间的粘连有关。
CTGF除了全长CTGF之外，还有Module 2 － Module 3间被切断产生的N末端(Module 1-2)CTGF和C末端(Module 3-4)CTGF。由于CTGF（C末端）容易被分解，所以血液中主要以CTGF （全长）和CTGF (N末端)的形式存在。CTGF (N末端)作为特发性肺纤维化(IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)的生物标志物备受期待3)，但由于CTGF（全长)和CTGF（N末端）同时存在，所以单独检测CTGF（N末端）非常困难。
◆试剂盒组成
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96次用 |
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抗体固相化孔板 |
1 plate |
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CTGF标准品 |
1支 |
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缓冲液 |
20 mL |
|
生物素结合抗体溶液 |
100 μL |
|
过氧化物酶结合链霉亲和素溶液 |
100 μL |
|
TMB溶液 |
12 mL |
|
反应终止液 |
12 mL |
|
清洗液（10×） |
100 mL |
|
标准品样品制备溶液 |
100 mL |
|
孔板封条 |
4片 |
◆CTGF ELISA试剂盒 Wako
FUJIFILM Wako可分别提供检测CTGF全长以及全长+N末端的ELISA试剂盒。通过组合使用两种ELISA试剂盒，可准确检测特发性肺纤维化(IPF)的生物标志物——血液中的N末端CTGF4)。
产品系列
|
产品名称 |
CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako |
CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako |
|
产品编号 |
290-84701 |
292-84901 |
|
检测对象 |
CTGF（全长） |
CTGF（全长+N末端） |
|
检测原理 |
|
|
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样品 |
人血清，人血浆(EDTA) |
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|
标准曲线范围 |
7.81-500 pM |
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|
所需样品量 |
人血清：5 μL，人血浆(EDTA)：10 μL |
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|
检测时间 |
2 h 50 min |
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|
检测法 |
显色法 |
|
◆性能数据
■ 全长，N末端片段，C末端片段的交叉性
分别使用各ELISA试剂盒与全长，N末端片段，C末端片段反应，确认其交叉性。
【结果】
CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长，CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长和N末端片段。
■ 与CCN家族的交叉性
确认了包含CTGF在内的与CCN家族的交叉率（500 pM，n=8）。
|
CTGF ELISA（全长） 交叉率 (%) |
CTGF ELISA（全长+N末端区域） 交叉率 (%) |
|
|
CCN1 |
<0.5 |
N.D. |
|
CCN2（CTGF） |
100 |
100 |
|
CCN3 |
<0.5 |
N.D. |
|
CCN4 |
<0.5 |
N.D. |
|
CCN5 |
<0.5 |
N.D. |
|
CCN6 |
<0.5 |
N.D. |
N.D. = 未检出
【结果】
FUJIFIM Wako的试剂盒在CCN家族中，对CCN2(CTGF)显示高特异性。
■ 加标回收测试
CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako
|
样品ID |
添加量 (pM) |
检测值 (pM) |
回收量 (pM) |
回收率 (%) |
|
人血清 |
0 |
61.5 |
― |
― |
|
10 |
71.4 |
9.9 |
99 |
|
|
50 |
110 |
48.5 |
97 |
|
|
100 |
163 |
102 |
102 |
|
|
150 |
215 |
154 |
103 |
|
|
300 |
370 |
309 |
103 |
|
|
平均 |
101 |
|||
|
人血浆（EDTA） |
0 |
71.5 |
― |
― |
|
10 |
80.8 |
9.3 |
93 |
|
|
50 |
121 |
49.5 |
99 |
|
|
100 |
174 |
103 |
103 |
|
|
150 |
227 |
156 |
104 |
|
|
300 |
380 |
309 |
103 |
|
|
平均 |
100 |
CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako
|
样品 |
添加量 (pM) |
检测值 (pM) |
回收量 (pM) |
回收率 (%) |
|
人血清 |
0 |
37.8 |
― |
― |
|
10 |
47 |
9.2 |
92 |
|
|
50 |
87.4 |
49.6 |
99.2 |
|
|
100 |
141 |
103 |
103 |
|
|
150 |
191 |
153 |
102 |
|
|
300 |
343 |
305 |
102 |
|
|
平均 |
99.6 |
|||
|
人血浆 (EDTA) |
0 |
16.9 |
― |
― |
|
10 |
26.2 |
9.3 |
93 |
|
|
50 |
65.6 |
48.7 |
97.4 |
|
|
100 |
122 |
105 |
105 |
|
|
150 |
173 |
156 |
104 |
|
|
300 |
326 |
309 |
103 |
|
|
平均 |
100 |
■ 稀释线性测试
CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako
|
人血清 |
人血浆 |
|
|
|
CTGF(全长) ELISA试剂盒 Wako
|
人血清 |
人血浆 |
|
|
|
◆应用数据
■ N末端CTGF的检测（稀释线性测试）
使用梯度稀释的人血清或人血浆(EDTA)，用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长+N末端， 用CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长。求差值计算CTGF（N末端）量，确认稀释线性。
|
|
|
|
样品 |
稀释倍率 |
CTGF（全长＋N末端）（pM） |
CTGF（全长）（pM） |
CTGF（N末端）(pM） |
|
人 血清 |
1/1 |
1735 |
952 |
783 |
|
1/2 |
875 |
495 |
380 |
|
|
1/4 |
417 |
237 |
180 |
|
|
人 血浆(EDTA) |
1/1 |
684 |
126 |
558 |
|
1/2 |
347 |
66.2 |
281 |
|
|
1/4 |
157 |
34.9 * 参考值 |
122 |
【结果】
使用该方法检测定量CTGF（N末端），可观察到高稀释线性。
■ 健康者和IPF患者血浆中N末端CTGF的检测
使用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako和CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako，检测从健康者以及特发
性肺纤维化（IPF）患者中提取的血浆（EDTA），并求出N末端CTGF的量。
|
健康者 |
|||
|
ID |
CTGF（全长+N末端）（pM） |
CTGF（全长）（pM） |
CTGF（N末端）（pM） |
|
1 |
494 |
83.4 |
411 |
|
2 |
535 |
116 |
419 |
|
3 |
580 |
155 |
425 |
|
4 |
661 |
129 |
532 |
|
5 |
383 |
63.5 |
319 |
|
mean |
421 |
||
|
SD |
75.6 |
||
|
IPF患者 |
|||
|
ID |
CTGF（全长+N末端）（pM） |
CTGF（全长）（pM） |
CTGF（N末端）（pM） |
|
1 |
1226 |
213 |
1013 |
|
2 |
1004 |
187 |
817 |
|
3 |
432 |
35.4 |
397 |
|
4 |
1422 |
278 |
1144 |
|
5 |
938 |
39.9 |
898 |
|
6 |
682 |
73.2 |
609 |
|
7 |
1123 |
168 |
955 |
|
8 |
849 |
45.5 |
804 |
|
9 |
857 |
60.6 |
796 |
|
mean |
826 |
||
|
SD |
221 |
||
【结果】
IPF患者血浆中N末端的CTGF量明显高于健康者。
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※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
FAQ
◆关于样品
Q1：血液样品建议使用何种抗凝剂？
A1：参考以下文献，肝素血浆中CTGF（N末端）的值高于EDTA血浆和柠檬酸盐血浆。因此，不建议使用肝素作为抗凝剂。
A1：<参考文献> Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).
A1： Subtraction method for determination of N-terminal connective tissue growth factor
◆关于试剂盒
Q1：试剂盒中的抗体是否有销售？
A1：FUJIFILM Wako供应以下固相化抗体。
A1：抗CTGFModule 1，单克隆抗体（30D2）（产品编号：018-27423）
检测抗体不单独销售。FUJIFILM Wako可供应Module 2识别抗体（产品编号：015-27433）及Module 4识别抗体（产品编号：019-27453），但与本试剂盒使用抗体的克隆不同。
Q2：标准品是如何标价的？
A2：标准品参考以下文献进行标价。
A1：Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010).
◆关于试剂盒的使用
Q1：本试剂盒进行检测时所需的试剂、器具和设备？
A1：使用本试剂盒需要以下试剂、器具和设备。
A1：● 纯净水（蒸馏水）
A1：● 标准溶液/样品稀释用试管
A1：● 清洗液稀释用玻璃器具（量筒/烧杯）
A1：● 可更换吸头的移液器（可准确移液10 μL以及 200~500 μL的一次性吸头）
A1：● 可连续分注100 μL的移液器
A1：● 具有吸水性的毛巾（清洗后去除孔板残留液体）
A1：● 涡旋振荡器
A1：● 微孔板振荡器（约500~800 rpm）
A1：● 96孔板用清洗器（建议使用）或清洗瓶
A1：● 读板器 (450±10 nm / 600~650 nm)
A1：● 数据处理软件
Q2：两个试剂盒必须配合使用吗？
A2：若检测CTGF (N末端, Module 1-2)，需两个试剂盒配合使用。
A1：若只检测CTGF（全长），只需购买CTGF(全长) ELISA试剂盒。
Q3：96次用可检测几个样品？
A3：标准品使用16孔（n=2），n=1时可检测80个样品，n=2时可检测40个样品。
Q4：试剂盒可分多次使用吗？
A4：可以，孔板设计为可每8个孔进行分割的样式，试剂盒包含充足数量的标准品。
A4：但是多次使用时，每次实验前都需重新绘制标准曲线，并且可检测的样品数量也会减少。另外，孔板封条只有4片，请根据需求进行使用。
参考文献
|
1. |
Biernacka, A., Dobaczewski, M., and Frangogiannis, N. G.: Growth Factors, 29(5), 196(2011). |
|
2. |
Mori T., et al.: J. Cell Physiol., 181(1), 153(1999). |
|
3. |
Kono, M. et al.: Clin. Chim. Acta, 412, 2211(2011). Plasma CCN2 (connective tissue growth factor; CTGF) is a potential biomarker in idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) |
|
4. |
Miyazaki, O. et al.: Ann. Clin. Biochem., 47, 205(2010). |