LabAssay™ Cholesterol
LabAssay™ 胆固醇检测试剂盒
血清中的胆固醇浓度与肝脏和肠道中的胆固醇生成、吸收、分解代谢及血液中的脂蛋白代谢密切相关。本产品为基于N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺钠（DAOS）的蓝色显色酶法试剂。微孔板法可用于测定小鼠、人血清中的总胆固醇。
◆检测原理
显色试剂作用于样品后，样品中的胆固醇酯类被胆固醇酯酶分解为游离的胆固醇和脂肪酸。生成的胆固醇与原有的游离胆固醇共同被胆固醇氧化酶氧化，同时产生过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶（HRP）的作用下，使得DAOS和4-氨基安替比林进行定量氧化缩合，生成蓝色色素。通过测定这种蓝色色素的吸光度，可计算出样品中总胆固醇的浓度。
◆试剂盒组成
１．缓冲液——150 mL×1瓶
２．显色剂——150 mL用×1瓶
３．标准液——5 mL×1瓶
◆试剂盒性能
● 标准曲线范围：50～592.2 mg/dL（mg/100 mL）
● 测定时间：约10 min
● 样品：血清、血浆（小鼠、大鼠、人）
● 所需样品量：2 μL
● 测定波长：主波长600 nm、副波长700 nm
◆标准曲线示例
◆检测操作方法
微孔板法
根据下表条件，在孔板内进行反应。
|
Tests |
标准 |
空白 |
|
|
显色剂 |
300 μL |
300 μL |
300 μL |
|
待测物 |
样品 2 μL |
标准溶液 2 μL |
－ |
|
充分混合，在37℃加热５min。以空白为对照，测定样品和标准溶液的吸光度。 |
|||
◆加标回收测试
胆固醇的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
人样品
|
人样品 |
添加量（mg/dL） |
测定值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率（%） |
|
血清样品 |
0 |
166.4 |
||
|
47.6 |
219.1 |
52.6 |
110.60% |
|
|
99.7 |
276.2 |
109.7 |
110.00% |
|
|
150.4 |
326.3 |
159.9 |
106.30% |
|
|
201.3 |
378.3 |
211.9 |
105.20% |
|
|
血浆样品（EDTA） |
0 |
130.2 |
||
|
47.6 |
181 |
50.8 |
106.60% |
|
|
99.7 |
237.8 |
107.6 |
107.90% |
|
|
150.4 |
280.5 |
150.3 |
100.00% |
|
|
201.3 |
343.2 |
213 |
105.80% |
小鼠样品
|
小鼠样品 |
添加量（mg/dL） |
测定值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率（%） |
|
血清样品 |
0 |
86.1 |
||
|
47.6 |
136.1 |
50 |
105.00% |
|
|
99.7 |
188.6 |
102.5 |
102.80% |
|
|
150.4 |
239.3 |
153.2 |
101.90% |
|
|
201.3 |
288.1 |
202 |
100.30% |
|
|
血浆样品（EDTA） |
0 |
35.5 |
||
|
47.6 |
84.5 |
49.1 |
103.10% |
|
|
99.7 |
134.4 |
98.9 |
99.20% |
|
|
150.4 |
188.9 |
153.5 |
102.10% |
|
|
201.3 |
230.6 |
195.1 |
96.90% |
大鼠样品
|
大鼠样品 |
添加量（mg/dL） |
测定值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率（%） |
|
血清样品 |
0 |
69.9 |
||
|
47.6 |
121.5 |
51.6 |
108.30% |
|
|
99.7 |
161.8 |
91.9 |
92.10% |
|
|
150.4 |
220.8 |
150.8 |
100.30% |
|
|
201.3 |
276.8 |
206.9 |
102.70% |
|
|
血浆样品（EDTA） |
0 |
42.6 |
||
|
47.6 |
91.8 |
49.2 |
103.30% |
|
|
99.7 |
137.6 |
95 |
95.30% |
|
|
150.4 |
180.1 |
137.5 |
91.50% |
|
|
201.3 |
235.8 |
193.2 |
96.00% |
◆样品检测示例
人血清样品
|
样品批次 |
测定值（mg/dL） |
平均值（mg/dL） |
SD |
CV（%） |
|
|
人血清 |
191.7 |
173.6 |
182.7 |
12.8 |
7 |
|
人血浆（EDTA） |
143.2 |
143.1 |
143.2 |
0.02 |
0 |
|
混合人血清，男性 |
|||
|
序号 |
平均值 |
SD |
CV（%） |
|
1 |
0.687 |
0.001 |
0.2 |
|
混合人K2EDTA血浆，男性 |
|||
|
序号 |
平均值 |
SD |
CV（%） |
|
1 |
※0.352 |
0.003 |
0.8 |
大鼠血清（10%稀释）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值（mg/dL） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
60 |
67.1 |
63.6 |
5.03 |
7.9 |
|
2 |
84.6 |
89 |
86.8 |
3.12 |
3.6 |
|
3 |
90.7 |
80.8 |
85.8 |
7 |
8.2 |
|
4 |
82.1 |
72.3 |
77.2 |
6.88 |
8.9 |
|
5 |
89.3 |
93.9 |
91.6 |
3.24 |
3.5 |
大鼠血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值（mg/dL） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
42.9 |
38.6 |
40.8 |
3.03 |
7.4 |
|
2 |
59.3 |
54.3 |
56.8 |
3.56 |
6.3 |
|
3 |
51.1 |
46.3 |
48.7 |
3.38 |
6.9 |
|
4 |
45.2 |
40.2 |
42.7 |
3.58 |
8.4 |
|
5 |
59.2 |
63.7 |
61.5 |
3.15 |
5.1 |
|
20% 稀释健康大鼠血清, Sprague Dawley，雄性 |
|||
|
序号 |
平均值 |
SD |
CV（%） |
|
1 |
※0.300 |
0 |
0 |
|
2 |
※0.371 |
0.004 |
1.1 |
|
3 |
※0.289 |
0.017 |
5.8 |
|
4 |
※0.365 |
0 |
0.1 |
|
5 |
※0.382 |
0.029 |
7.6 |
|
健康大鼠K2EDTA血浆，Sprague Dawley，雄性 |
|||
|
序号 |
平均值 |
SD |
CV（%） |
|
1 |
※0.333 |
0.004 |
1.2 |
|
2 |
※0.356 |
0.003 |
0.8 |
|
3 |
※0.325 |
0.02 |
6 |
|
4 |
※0.218 |
0.005 |
2.6 |
|
5 |
0.515 |
0.01 |
1.9 |
小鼠血清（20%稀释）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值（mg/dL） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
95.4 |
89.3 |
92.4 |
4.31 |
4.7 |
|
2 |
85.3 |
84.5 |
84.9 |
0.58 |
0.7 |
|
3 |
68.6 |
71 |
69.8 |
1.71 |
2.5 |
|
4 |
80.9 |
73.6 |
77.3 |
5.22 |
6.8 |
|
5 |
64.8 |
66.8 |
65.8 |
1.45 |
2.2 |
小鼠血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值（mg/dL） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
41.2 |
39.1 |
40.1 |
1.51 |
3.8 |
|
2 |
43.7 |
40.8 |
42.2 |
2.01 |
4.8 |
|
3 |
35.8 |
38.7 |
37.2 |
2.08 |
5.6 |
|
4 |
43.1 |
41.4 |
42.2 |
1.23 |
2.9 |
|
5 |
39.3 |
40.7 |
40 |
0.99 |
2.5 |
| 20% 稀释健康小鼠血清，CD-1（ICR），雄性 | |||
|
序号 |
平均值（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
|
1 |
1.118 |
0.001 |
0.1 |
|
2 |
0.788 |
0.007 |
0.9 |
|
3 |
0.715 |
0.022 |
3.1 |
|
4 |
0.794 |
0.002 |
0.2 |
|
5 |
0.829 |
0.005 |
0.6 |
|
健康小鼠血浆K2EDTA, CD-1（ICR），雄性 |
|||
|
序号 |
平均值 |
SD |
CV(%) |
|
1 |
※0.309 |
0.002 |
0.6 |
|
2 |
※0.320 |
0.002 |
0.6 |
|
3 |
※0.205 |
0.004 |
2 |
|
4 |
※0.179 |
0.008 |
4.6 |
|
5 |
※0.305 |
0.017 |
5.6 |
|
健康比格犬EDTA血浆，雄性 |
||||
|
序号 |
平均值（mEq/L） |
SD |
CV(%) |
年龄 |
|
1 |
0.442 |
0.0033 |
0.7 |
4 |
|
2 |
0.427 |
0.011 |
2.6 |
6 |
|
3 |
※0.308 |
0.0037 |
1.2 |
10 |
|
4 |
0.478 |
0.0123 |
2.6 |
12 |
|
5 |
0.473 |
0.005 |
1 |
6 |
|
6 |
※0.367 |
0.0047 |
1.2 |
11 |
|
7 |
0.78 |
0.0133 |
1.7 |
10 |
|
8 |
0.411 |
0.0387 |
9.4 |
12 |
|
健康比格犬血清，雄性 |
||||
|
序号 |
平均值（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
1 |
0.656 |
0.0027 |
0.4 |
4 |
|
2 |
0.665 |
0.032 |
4.8 |
6 |
|
3 |
0.425 |
0.009 |
2 |
6 |
|
4 |
※0.38 |
0.0057 |
1.5 |
11 |
|
5 |
0.882 |
0.007 |
0.8 |
12 |
|
6 |
0.599 |
0.006 |
1.1 |
6 |
|
7 |
1.006 |
0.0267 |
2.7 |
10 |
|
8 |
0.506 |
0.006 |
1.2 |
4 |
|
健康短毛猫EDTA血浆，雄性 |
||||
|
序号 |
平均值（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
1 |
1.099 |
0.0103 |
0.9 |
0.5 |
|
2 |
※0.174 |
0.0033 |
2 |
1 |
|
3 |
※0.241 |
0.0043 |
1.7 |
3 |
|
4 |
※0.320 |
0.0067 |
2.2 |
0.5 |
|
5 |
※0.359 |
0.006 |
1.7 |
3 |
|
6 |
※0.197 |
0.012 |
6.2 |
3 |
|
7 |
※0.215 |
0.024 |
11.1 |
0.5 |
|
8 |
※0.131 |
0.016 |
12.3 |
1 |
|
健康短毛猫血清，雄性 |
||||
|
序号 |
平均值(mEq/L) |
SD |
CV(%) |
年龄 |
|
1 |
0.717 |
0.0117 |
1.6 |
3 |
|
2 |
0.635 |
0.01 |
1.6 |
3 |
|
3 |
1.004 |
0.0053 |
0.5 |
6 |
|
4 |
0.981 |
0.0093 |
0.9 |
4 |
|
5 |
0.636 |
0.017 |
2.7 |
6 |
|
6 |
1.193 |
0.0267 |
2.3 |
6 |
|
7 |
1.022 |
0.0893 |
8.8 |
1 |
|
8 |
※0.382 |
0.0157 |
4.1 |
1 |
◆稀释线性度测试
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※ 产品已更新，旧编号为：294-65801
参考文献
|
1. |
Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis ※小鼠肝脏提取物 |
|
2. |
Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291(2015). Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models ※大鼠肝组织提取物 |
|
3. |
Yoshioka, H. and Onosaka, S. : Fundam. Toxicol. Sci., 3, 151(2016). Zinc sulfate pretreatment prevents carbon tetrachloride-induced lethal toxicity through metallothionein-mediated suppression of lipid peroxidation in mice ※小鼠血浆 |
|
4. |
Fujii, N. et al. : Aging Cell, 16, 508 (2017). Sterol regulatory element-binding protein-1c orchestrates metabolic remodeling of white adipose tissue by caloric restriction※大鼠血浆 |
|
5. |
Ushio, M. et al. : Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 305, E293 (2013). Ezetimibe prevents hepatic steatosis induced by a high-fat but not a high-fructose diet ※小鼠组织提取物 |
|
6. |
Kobayashi, Y. et al. : Biosci. Biotechnol. Biochem., 74, 2385 (2010). Ameliorative Effects of Mulberry (Morus alba L.) Leaves on Hyperlipidemia in Rats Fed a High-Fat Diet: Induction of Fatty Acid Oxidation, Inhibition of Lipogenesis, and Suppression of Oxidative Stress ※大鼠组织提取物 |