新标准 抗体纯化树脂
KANEKA KanCapA™
本产品为 Protein A 亲和层析树脂。用于从活体样本及细胞培养上清纯化免疫球蛋白及包含 Fc 段的重组抗体。
本产品由高交联纤维素微珠及新研发的耐碱 Protein A 配体构成，可用于 IgG 的亲和纯化。
◆特点
• 耐碱
• 良好洗脱条件
• 高抗体结合能力
• 可循环使用
• 便于扩增
◆关于改良 Protein A
KanCapA™ 采用的不是天然 Protein A，而是使用变异型Ｃ域５聚物的新型 Protein A。
天然 Protein A的Ｃ域结合于 Fc 段，也结合于 Fab 段，其中与VH3亚家族抗体的反应性较高。该类型的解离需要弱酸条件下洗脱。
为改善该问题，使用分子设计系统重新设计分子，研发了保持耐碱性、改善 Fab 段的非特异性结合及洗脱曲线的 Protein A。
本产品采用的 Protein A
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1. C5 聚体蛋白质 |
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良好pH条件下清晰地洗脱抗体 |
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2. 较高的耐碱性 |
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3. 减少 Fab 段的非特异性结合 |
◆产品特性
KANEKA KanCapA™ 产品特性
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矩阵 |
高交联纤维 |
※ 1) 平均粒度为累积体积分布的中间粒度 2) ５%动态结合容量为前端分析测定（停留时间３分钟） 3) 可在强碱条件下清洗，但请避免长时间的清洗 4) 请勿冷冻 |
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平均粒度1) |
65-85 μm |
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配体 |
Protein A，重组(抗强碱) |
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结合 |
化学结合（还原胺化） |
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动态结合容量2) |
≧35 mg 人多克隆 IgG／mL载体 |
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化学稳定性3) |
使用亲和层析通用可溶性溶媒时较稳定 |
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pH 范围3) |
pH 2-13 |
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静止清洗条件3) |
0.1-0.5 mol/L氢氧化钠 6-8 mol/L尿素、6 mol/L盐酸胍 |
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流量 |
最大 500cm/h（层高：20-25 cm） |
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停留时间 |
≧３分钟（建议：４-６分钟） |
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保存条件4) |
20%乙醇浑浊液，１～10℃ |
◆应用
1、Fab段 纯化应用
• 利用 KANEKA KanCapA™ 的特点，可从经木瓜蛋白酶处理后的 IgG 溶液分馏 Fc 段及 Fab 段。
2、IgG 洗脱曲线（pH3.5 & pH3.0）
• 洗脱范围已优化，可清晰地分馏提纯。
3、通过强碱清洗进行树脂循环
• 进行 300 次循环处理后（0.1M 氢氧化钠溶液 15 分钟），IgG 的结合容量的减少率仍低于20%，表明其循环性能较高。
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使用 0.1 M 氢氧化钠溶液进行循环处理后的 IgG 结合活性曲线数据 |
循环处理后（0.1 M 氢氧化钠溶液 15 分钟）的IgG回收率及 Protein A 配体的渗滤量的曲线数据 |
4、动态结合容量 曲线数据
• 在4-6分钟停留时间过程中，DBC 较高。
※ 动态结合容量表示纯化样本在流动的状态下，回收程度的数值。动态结合容量较高的载体的流速较快，可回收大量目标分子，因此可以认为在短时间内有效纯化目标分子的优质载体。
KANEKA KanCapA™的Dynamic Binding Capacity (DBC; 动态结合容量) 曲线数据
5、不同大小的树脂填充装柱的压力/流速绘图数据
填充依赖压力的计算方法是从整体压力减去系统压力。
6、KANEKA KanCapA™ 于各种大小的柱的填充效果
• KANEKA KanCapA™ 适用于各种大小的柱。
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充填方法 |
L. D.(cm) |
高度(mm) |
培养皿/m |
非对称性 |
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流动填充 |
4.4 |
200 |
5710 |
1.14 |
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轴向力填充 |
7 |
199 |
6063 |
1.06 |
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流动填充 |
10 |
201 |
5276 |
1.18 |
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流动填充 |
30 |
200 |
5208 |
1.17 |
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轴向力填充 |
45 |
233 |
4712 |
1.09 |
以下是脉冲注入数据：
可溶性溶媒：1(v/v)% 丙酮
注入量：1% 柱容量
流速：60 cm/h
相关资料：
抗体纯化树脂说明书 |
抗体纯化树脂.pdf |
参考文献
使用Kaneka KanCapA纯化单克隆抗体
使用该Kaneka KanCapATM从CHO细胞培养上清中纯化单克隆抗体