BINKIT^® NK 细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）

 

◆原理

 

　　BINKIT^® 可从外周血单核细胞扩增高活性的自然杀伤（NK）细胞。

 

◆优点・特色

 

●　无需饲养层细胞，即可从外周血细胞（PBMCs）中扩增 NK 细胞

●　３周时间内 NK 细胞的数目可扩增几百到几千倍

●　NK 细胞将获得增强的细胞杀伤性

●　该试剂盒适合 20~50 mL 的外周血细胞

●　无动物来源蛋白（含人白蛋白）

 

 

◆案例・应用

 

<试剂盒组成>

●　NK 细胞初始培养基

●　NK 细胞初始培养瓶

●　NK 细胞传代培养基

●　BINKIT^® 明细表（ PDF 格式）

 

<未提供材料>

●　Ficoll 淋巴细胞分层液（GE Healthcare）

●　无菌 PBS

●　FBS 或自体血浆（56℃ 加热 30 分钟以灭活）

 

<结果>

 

图 1 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用 BINKIT^® 对外周血单核细胞进行 NK 细胞扩增，CD3-CD56+ 细胞从 15.8％ 增加到 88.6％ 。

 

图 2 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用 BINKIT^® 对外周血单核细胞（来自健康自愿者，HD, ｎ=３）进行 NK 细胞扩增。

细胞计数（左）和倍率的变化（右）表明 NK 细胞体在外高效扩增。

 

 

图3  使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

分别以 BINKIT 扩增的 NK 细胞（实线）和从３名志愿者新鲜分离的 NK 细胞（虚线）来检测 NK 细胞对 K562 细胞的杀伤性。

结果表明，扩增后的 NK 细胞对 K562 细胞杀伤性显著增强（Ｐ< 0.01）。

 

<培养步骤>

(1) 准备试剂

在 NK 细胞初始培养基和 NK 细胞传代培养基中，加入５% (v/v) 的热灭活 FBS 或自体血浆。

 

(2) 制备外周血单核细胞（PBMCs）

通过 Ficoll 密度梯度离心，从人全血中分离外周血单核细胞。

 

(3)清洗NK细胞初始培养瓶

加入 10 mL PBS 至 NK 细胞初始培养瓶。倾斜培养瓶使 PBS 覆盖整个表面。

将培养瓶中液体全部倒出，小心以免刮伤培养瓶的表面。重复洗涤过程两次。

 

(4)从PBMCs中培养NK细胞

将 1×10⁶ cells/mL 的 PBMCs 悬浮于 NK 细胞初始培养基中。每 1 mL 细胞悬浮液加入 40 μL 的 NK 细胞初始混合物。

细胞悬液转移至预洗涤的 NK 细胞初始培养瓶，在 37℃，５％的 CO₂ 培养３天。

 

(5)更换培养基及传代

同贴壁细胞处理一样，转移时置于锥形离心管，200×g 离心８分钟。

去除上清，将 1×10⁶ cells/mL 细胞悬浮于添加了5% (v/v) 热灭活 FBS 或自体血浆的NK细胞传代培养基中。

转移后的悬浮细胞置于常规培养瓶中，在 37℃，5％ CO₂ 条件下培养。

每２-３天将 0.8×10⁶ cells/mL 细胞置于完全 NK 细胞传代培养基中，进行传代培养。

 

<建议培养期>

２-３周

 

注意：试剂仅供科研使用，不可用于临床。 

 

参考文献

1.	Xuewen Deng, Hiroshi Terunuma, Mie Nieda, Weihua Xiao, Andrew Nicol, Synergistic cytotoxicity of ex vivo expanded natural killer cells in combination with monoclonal antibody drugs against cancer cells, Int Immunopharmacol, 14 (2012) 593-605 PMID: 23063974