食品分析用
α-葡萄糖苷酶活性抑制检测试剂盒
淀粉分解产生二糖，α-葡萄糖苷酶能分解二糖产生葡萄糖，使血液中的血糖升高。因此，可通过抑制α-葡萄糖苷酶来抑制血糖升高。
近来有研究表明从不同的植物体中可以检测到α-葡萄糖苷酶抑制物质，研究人员致力于将其应用到抑制血糖升高功能性食品的研究。
α-葡萄糖苷酶活性抑制检测试剂盒能测定对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。与LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒配套使用，可用于检测食品等成分中对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。
◆试剂盒组成
|
试剂名称 |
容量 |
数量 |
主要成分 |
|
酶试剂 |
1 mL |
2 |
α-葡萄糖苷酶 |
|
缓冲剂 |
50 mL用 |
2 |
马来酸/顺丁烯二酸二钠 |
|
基质液1 |
20 mL用 |
2 |
D-(+)-麦芽糖 |
|
基质液2 |
20 mL用 |
2 |
蔗糖 |
|
阳性对照 |
100 mg |
1 |
阿卡波糖 |
*阿卡波糖是一种新型口服降糖药。在肠道内竞争性抑制葡萄糖苷水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相应减缓，因此可具有使饭后血糖降低的作用。
◆除试剂盒外所需器具、器材
● LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒
● 96孔透明微孔板
● 酶标仪（505 nm吸光度）
● 微量移液管
● 恒温槽（37℃）
◆实验操作流程
◆检测步骤
Ⅰ．配制试剂
决定稀释倍数的预实验
|
麦芽糖 |
蔗糖 |
|
|
基质溶液 |
麦芽糖溶液 50 μL |
蔗糖溶液 50 μL |
|
纯净水 |
25 μL |
|
|
37℃，3分钟 |
||
（葡萄糖定量）
１．6孔微孔板中分别加入100 μL的酶反应液和稀释的葡萄糖标准液（浓度：15,10,5,2.5 mg/dl）添加150 μL LabAssay™ Glucose显色剂，充
分混合。
２．37℃下进行10分钟温育，测定505 nm的吸光度。
３．麦芽糖的葡萄糖生成量为10 mg/dL，蔗糖为5 mg/dL，以此求稀释倍率。
Ⅱ．正式试验（酶反应）
＜样品配制＞
|
麦芽糖 |
蔗糖 |
|
|
基质溶液 |
麦芽糖溶液 50 μL |
蔗糖溶液 50 μL |
|
样品溶液或阳性对照溶液 |
25 μL |
|
|
37℃，3分钟 |
||
|
酶稀释液 |
酶稀释液25 μL（根据预实验决定稀释倍数） |
酶稀释液25 μL（根据预实验决定稀释倍数） |
|
搅拌后，37℃下，准确反应30分钟 |
||
|
纯净水 |
400 μL |
|
|
立即在沸水中加热3分钟后，冷却 |
||
＜空白对照配制＞
|
麦芽糖 |
蔗糖 |
|
|
基质溶液 |
麦芽糖溶液 50 μL |
蔗糖溶液 50 μL |
|
样品溶液或纯净水 |
25 μL |
|
|
纯净水 |
400 μL |
|
|
酶稀释液 |
酶稀释液25 μL（根据预实验决定稀释倍数） |
酶稀释液25 μL（根据预实验决定稀释倍数） |
|
立即在沸水中加热3分钟，冷却 |
||
Ⅲ．葡萄糖定量
→同预试验，使用LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒测定。
Ⅳ．IC50计算
１．以对照溶液的葡萄糖生成量为α-葡萄糖苷酶的100%活性，通过各浓度样品溶液的葡萄糖生成量，求α-葡萄糖苷酶比活性；
２．以样品或阳性对照溶液浓度（酶反应液中的终浓度）为横轴，以α-葡萄糖苷酶比活性为纵轴绘制半对数线图，从得出的近似曲线算出比活
性50%时样品的浓度（IC50值）。
相关资料
α-葡萄糖苷酶活性抑制检测试剂盒