本品是对应5-hydroxymethylcytosine的单抗，能用于Hydroxymethylated DNA IP (hMeDIP)分析。

背景

5-hydroxymethylcytosine是最近发现的修饰碱基，由于oxygenase的运动，从5-methylcytosine(5-mC)被转换成5-hydroxymethylcytosine(5-hmC)。

    5-hmC作为第六个碱基在生物体内有什么作用还不明朗，但是，普遍认为它与5-hmC起不同的重要作用。使用普通的硫酸氢钠法不能区别5-mC和5-hmC，所以急需找到可以特异性检测5-hmC的方法。要分别5-mC、5-hmC的序列，利用抗体反应亲和性的技术比较有效，还可以作为特异性的浓缩方法。2

例1

【辨别Dual MeDIP：5-mC和5-hmC】

把基因组DNA用超声波处理，片段化到300 ～ 500 bp，用5-hydroxymethylcytosine antibody (5-hmC抗体：本品)进行羟甲基化DNA IP分析(hMeDIP)。同时对hMeDIP的非结合分层部分，用5-methylcytosine antibody(5-mC抗体)进行甲基化DNA IP分析(MeDIP)。

例2

【和其他公司产品比较】

对5-hydroxymethylcytosine使用2种抗体：“Diagenode公司的单抗(本品)”和“其他公司产品的多抗”进行羟甲基化DNA IP分析(hMeDIP)。在hMeDIP里使用了Diagenode公司的hMeDIP kit。

橙字：Diagenode公司产品单抗

黑字：其他公司单抗

例3

【对单链DNA和双链DNA进行羟甲基化DNA IP分析（hMeDIP）的有效性】

使用5-hydroxymethylcytosine抗体，进行hMeDIP。作为阴性对照，使用小鼠IgG。使用1μg 由hMeDIP kit(Diagenode公司)的GenDNA module制备的ES细胞(E14)的DNA，经BioruptorR进行超声波处理，片段化到300-500bp。

而经免疫沉淀得到的DNA，可使用Sfi1 (splicing factor 1) gene的引物对进行定量PCR的分析。

例4

【用点印迹法时Diagenode公司的5-hmC抗体的特异性】

用5-hmC(1)和5-hmC(2)、C(3)作为各自的底物的PCR产物，经2~200ng(各自含有0.1~10pmol的C碱基)的膜进行点印迹。

在5-hmC抗体里(4μg/ml(稀释倍率1:500))孵育膜。膜暴光30秒。

数据资料

5-hydroxymethylcytosine antibody (diagenode社英語版)

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