血蓝蛋白（KLH）（T细胞依赖性抗原）
大鼠免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒
药品的免疫毒性实验相关方针ICH S8中推荐在无特定免疫毒性标靶情况下进行的T细胞依赖性抗体生产实验（TDAR、T cell Dependent Antibody Reaction）。TDAR被称为T细胞依赖性抗原。例如：通过KLH（Keyhole limpet hemocyanin）的投放对一次抗原刺激而生产IgM性状抗体。接下来进行二次抗原刺激后通过类别转换作用可观察到产生IgG性状抗体。由于本试剂盒可简便测定大鼠血液中IgM性状的抗KLH浓度，所以十分符合上文所述的目的。可与大鼠抗KLH-IgG检测试剂盒配套使用。
◆特点
● 测定时间短（总反应时间：2小时20分钟）
● 微量样本即可测定。
● 使用无害的防腐剂。
● 全部试剂为溶液即用类型。
● 高测定精度和高重复性。
◆试剂盒组成
|
组成品 |
状态 |
包装 |
|
KLH包被96孔板 |
清洗后使用 |
96 wells（8×12）/1个 |
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抗KLH大鼠IgG标准溶液（300 ng/mL） |
稀释后使用 |
200 μL/1瓶 |
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缓冲液 |
直接使用 |
100 mL/1瓶 |
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HRP结合抗大鼠IgG抗体 |
稀释后使用 |
100 μL/1瓶 |
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显色液（TMB） |
直接使用 |
12 mL/1瓶 |
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终止液（1M H2SO4） ※小心轻放 |
直接使用 |
12 mL/1瓶 |
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浓缩清洗液（10×） |
稀释后使用 |
100 mL/1瓶 |
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孔板密封膜 |
3个 |
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产品说明书 |
1本 |
◆物种交叉性
3000 ng/mL时数据—：无交叉性
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动物种类 |
对象物质 |
反应性及反应率（%） |
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大鼠 |
IgG |
100 |
|
IgM |
― |
|
|
IgA |
― |
|
|
IgE |
― |
|
|
小鼠 |
IgG |
― |
|
IgM |
― |
|
|
IgE |
― |
◆样本信息
● 大鼠血清·血浆
● 50 μL/well（稀释样本）
※ 用附带的缓冲液将样品稀释至标准曲线范围内。
※ 为了避免非特异反应发生，请将样本稀释500倍以上。
◆测定范围
0.47~30 ng/mL（标准曲线范围）
◆实验数据
精度测试（组内变异）
|
样本 |
A |
B |
|
1 |
11.2 |
3.93 |
|
2 |
11.0 |
3.74 |
|
3 |
11.3 |
3.83 |
|
4 |
11.1 |
3.70 |
|
5 |
11.5 |
3.99 |
|
Mean |
11.2 |
3.84 |
|
SD |
0.190 |
0.121 |
|
CV（%） |
1.7 |
3.2 |
单位：ng/mL
重复性测试（组间变异）
|
测定日/样本 |
E |
F |
G |
|
0天 |
15.3 |
3.84 |
0.969 |
|
1天 |
15.3 |
3.84 |
0.954 |
|
2天 |
15.4 |
3.83 |
0.958 |
|
3天 |
15.2 |
3.82 |
0.976 |
|
Mean |
15.3 |
3.83 |
0.965 |
|
SD |
0.0615 |
0.0067 |
0.0102 |
|
CV（%） |
0.40 |
0.18 |
1.1 |
单位：ng/mL，n=4
加标回收测试
样本C
|
添加量 |
实测值 |
回收量 |
回收率（%） |
|
0.00 |
1.18 |
— |
— |
|
0.466 |
1.65 |
0.470 |
101 |
|
1.40 |
2.53 |
1.35 |
96.4 |
|
2.33 |
3.48 |
2.30 |
98.7 |
单位：ng/mL，n=2
样本D
|
添加量 |
实测值 |
回收量 |
回收率（%） |
|
0.00 |
12.5 |
— |
— |
|
4.90 |
17.2 |
4.70 |
95.9 |
|
10.7 |
23.1 |
10.6 |
99.1 |
|
15.4 |
27.2 |
14.7 |
95.5 |
单位：ng/mL，n=2
稀释直线性测试
2个血清样本连续用稀释缓冲液稀释3个梯度测定结果，直线回归值R2=0.9992~0.9998