Wako热启动 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq

Wako热启动 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq

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本产品是Hot Star PCR用的耐热型DNA聚合酶。进入PCR循环前先经过95℃,5分钟的热处理,对本产品进行酶活性化处理。

在PCR初期需要进行过量酶活抑制的热启动PCR,以抑制引导错误、无效酶失活。根据用途的不同,附有可分开使用的2种10倍浓度的反应缓冲液。

◆特点

● 高特异性和DNA高回收率
● 具有热启动功能,可在室温条件下配制反应液
● 最适用于多路传输PCR
● 极少有宿主源DNA混入,纯度高

◆产品组成

Hot Start Gene Taq 250 units 50 units
dNTP 混合物
(2.5 mmol/L each)
800 μL×1瓶 160 μL×1瓶
10×Gene Taq通用缓冲液
(15 mmol/Ll Mg2+)
1 mL×1瓶 1 mL×1瓶
10×Brilliant Buffer
(20 mmol/L Mg2+)
1 mL×1瓶 200 μL×1瓶

◆产品信息

M.W. 68 kDa
活性 2.5 units/μL
单位的定义 1 unit是指以活化小牛胸腺DNA为引物/模板,在74℃下,30分钟内,将10nmol的脱氧核苷酸渗入不溶酸沉淀物,使其酶活化。
形状 20 mmol/l Tris-HCl (pH8.0)、100 mmol/l KCl、0.1 mmol/l EDTA、0.5 % Tween 20、1 mmol/l DTT、50%甘油
纯度 将10 units本酶和1μgλ/HindⅢ digest,在74℃下反应1小时,无法辨别对琼脂糖凝胶电泳样品的影响。

 

◆实验案例

以HeLa DNA(50ng)为模板,对下列三种扩增困难的引物进行Shuttle PCR。

【引物】

・A-1
F:5′-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3′
R:5′-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3′
・A-2
F:5′-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3′
R:5′-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3′
・A-3
F:5′-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3′
R:5′-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3′

【实验方法】

模板DNA 50 ng
引物 (10 μM each) 1 μL
10×反应缓冲液 5 μL
聚合酶 5 μL
dNTP 混合物 0.2 mM
聚合酶 0.25 U
总量 50 μL
PCR条件 95℃, 5 分钟

(95℃, 30 sce→68℃, 1.5 min)×30 周期

68℃, 3 分钟

4℃

 

【结果】

在热启动Gene Taq使用Brilliant Buffer,即使低特异性的引物,也可实现高特异性扩增,使目的扩增产物取得高回收量。

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◆产品信息

产品编号 产品名称 包装
313-07044 热启动基因Taq酶

Hot-Start Gene Taq

50 units
319-07041 250 units
315-07043 250 units×4